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離心液相層析法提取色譜純卵磷脂

卵 磷脂又稱磷脂酞膽堿,    廣泛應用于生物遺傳工程及臨床等方面。     雖然蛋黃中含磷
 
脂 相當豐富, 而且其中卵磷脂占總磷脂的比例高達約 7 0 外, 但由于磷脂種類複雜, 性質相近 , 不易被分離, 而又易于氧化、 水解, 故大量提取色譜純卵磷脂有一定困難。 目前國内尚
 
無 色譜純卵磷脂産品供應,     國外在近 30  年來對色譜純卵磷脂提取、   精制方面已做 了大量
 
工 作。    從且a n al  a n  等山 開始,    先後有人試用雙柱、   單柱或高效液相層析、   離 子交換 及
 
經 化學修飾的卡普隆吸附法等法,      所有方法都有一定 的缺 點,     直到 19 81  年還在改 進
中 〔1 ~ 石, 
 
本 文旨在尋找适合國内情況,   并能快 速、  有效地大量 提取色譜純卵磷脂 的方法。    經試
 
驗對比證 明,   下列方法實際可行。
材 料 與 方 法
 
一 、材料藥品 與儀器
 
新 鮮雞蛋黃、  氧化鋁、  矽膠 G 和矽膠 H (層析用規格) 、  氯仿、   甲醇、   乙醇、   丙酮和氯化
 
幅 均為分析純 。
 
離心液相層 析儀 ( 日本、   日立 C L O一 5 型 ) ,      原子吸收光譜儀( 日本,    日立 1 8 0 7 0 型 ) ,   錨
 
離子 選擇電極。二、 方法 ( 一 )
1 . 有機溶 劑 法提取粗品 卵磷脂  取一定量的新鮮雞蛋黃,      用适當有機溶劑 反複 沉澱、  溶解、  蒸掉 溶劑 、  幹燥,  得淡黃色蠟狀粗品卵磷脂,   低溫保存。
 
2 . 離心 液 相 層析 法精制 卵磷脂 于離心液相層析儀的進料孔加入 防漏劑, 用有機溶劑将氧化鋁調 制成稀漿, 由進料孔連續灌入。 同時 , 将離心盤轉速調**“ 第 5 擋;, 待氧化鋁鋪盤完畢, ` 立即自動連 續吸入有機溶劑, 使轉盤中央保持适量溶劑。 取粗品卵磷脂上樣液
 
一定量 ,   吸入轉盤進料孔,   上樣完畢。   立即吸入有機棍合洗脫液,   控制流量 ,   每餾分為 02 ~
 
05  m l ,    收集洗脫液,   第 1 ~  3 管為無色澄清液 ,  第 4 ~  5 管出現微黃色澄 明液,  第 6 ~  7 管為
 
乳光液體, 第 8 ~ 1 4 管為無色澄清液。 從 6 ~ 41 管用顯色劑檢驗呈陽性, 第 場 管以後轉陰性。 陽性各餾分液分别經單向薄闆或矽膠紙層析證實為色譜均一的卵磷脂。 合并液經
 
減壓 蒸掉溶劑,  得 白色蠟狀精制品卵磷脂。
 
還可用矽 膠吸 附劑替代 氧化鋁,   用有機溶劑調成漿液,     控制轉盤 轉速為“ 第 5 擋”  ,     将
 
矽 膠漿灌入進料孔,    進行鋪盤,   矽膠層厚 3 ~ ,    取一定量粗品卵磷脂上樣液,   由進料孔上
 
樣 ,   待上樣完畢,   将洗脫劑連續進入進料孔,  控制流量,  收集洗脫液以每餾分為 20 ~50  m l,
 
用顯色劑檢驗呈陽性反應 ,  第 1 ~  2 管無色液,    第 3 ~  4 管黃色液,    均為陰性,   第 5 ~  8 管無
 
色澄清呈陽性反應 , 第 9 管以後又轉陰性, 經薄闆或矽膠紙層析鑒定為一個斑點, 合并色譜均一的餾分, 減壓蒸去溶劑、 幹燥, 得白色蠟狀精制卵磷脂。
 
三、     方法 ( 二)
 
1 . 氛化 錫 複合 法提取粗品 卵磷 脂 取一定量 的新鮮蛋黃, 用有機溶劑提取 3 次, 提取液過濾後, 用氯化福溶液沉澱完全, 靜置 2 五J 過 濾, 得白色沉澱物, 用有機溶劑沉澱、 溶解, **後 得白色蠟狀物。
2 . 離心液 相層析法精制卵磷脂  将已鋪有氧化鋁的離心轉盤,      控 制 轉速在  第 壓
 
 , 由中央進料孔吸入溶劑。 然後将上述 1 . 中複合物溶液取一定量上樣。 上樣完畢, 由進料 口 連續吸入有機棍合洗脫液, 控制流量 , 用紫外吸收監測, 自動收集餾分。 同時用顯色劑作陽性檢測 , 将單向薄闆層析為同一斑點的餾分合并。 合并液減壓蒸去溶劑, 得精制
卵磷脂
 
精制卵磷脂的質量鑒 定是通過單向薄闆層 析:6[ 與美國 肛G M A 優質卵磷脂 進 行對比。 同時又 以 引進雙向薄闆層 析确證為一個斑點。 **後通過硝化定磷、 氮, 求得氮磷比
值 。雜質檢測 ,   通過原子吸收光譜及福離子選擇電極法檢測偏離子含量 ,   合乎規定要求。
 
 
讨 論
 
在方法( 一 ) 中粗品卵磷脂提取的後過程中改用氯仿取代石油醚,      實驗結果表 明不僅
 
不影響精制品的質量與收率,   且可改善操作條件,  提高安全性,   有利于大量生産。
 
對精制品卵磷脂質量鑒 定方法上 的改進 ,   除了采用曆來所沿用的單向薄闆層析之外,
 
又 以引進的雙 向薄闆層析法,     來提高色譜純 精制品質量 的可靠性。      同時又采用矽膠紙 取
 
代 薄闆進行層析鑒定,    效果相同,     但使用矽膠紙因可省去鋪闆,     因而在方法上更為簡便實
 
用。
 
方法 ( 二 ) 的特點是氯化 福複合沉澱所得粗制品包含色素雜質極少 , 色 澤較 白。 在精制品質量檢測方面改用原子吸收光譜和福離子選擇電極法, 可進一步提高對微量福離子
 
檢測 的靈敏度,   以保證所得到 的卵磷脂質量符合要求。
 
采用制備型 離心液相層析法 精制 卵磷脂,     在國内外均尚未見有報道。      由于該法不僅
 
塔闆數多 ,    分離效率高,     而且離心洗脫流量大,    因而可以大大縮短精制過程的時間,     比六
 
十年代的報道方法快 1 5 ~  18  倍。
 
生 産上采用離心液相層析法的可能性:   同類型離心層 析儀在國内已有産 品供應 ( 北京
 
青 雲儀器廠、 L B O  型 ) 。 若作為大規模生産上專用還可簡化結構, 放大産量 , 設計成專用型離心液相層 析儀, 從材料與技術方面 來看, 在國 内是完全可行的。
 
總之,     采用上述方法 ( 一 ) 或 ( 二) 來提取卵磷脂粗品,    配合離心液相層析精制法,     快速
 
提取較大量 的色譜純 卵磷脂是 實際可行的。
 
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